1、首先,乙腈價格高
乙腈,特別是HPLC級的價格很高,但是,文獻或LC廠家所示的條件,多用乙腈,這是為什么呢?現(xiàn)就此談?wù)劇?/p>
2、吸光度
乙腈HPLC級的小。乙腈和甲醇的市銷HPLC級和優(yōu)級的吸收光譜中,乙腈HPLC吸收zui?。ㄌ貏e是在短波長上小)。所謂HPLC級是除去具有吸收UV的雜質(zhì),在規(guī)定的波長上吸光度限制在規(guī)格值以內(nèi)。在UV檢測時,產(chǎn)生的噪聲小,因此在進行UV短波長上的高靈敏度分析時乙腈HPLC級zui適宜。另外,在UV檢測中的梯度基線上也是乙腈HPLC級產(chǎn)生鬼峰少,雖然,其他與水相溶性高的有機溶劑有各種各樣,但很難能找到比乙腈HPLC級吸收更小的。另外,甲醇的HPLC級和優(yōu)級,雖然所得的光譜相差不大,但是優(yōu)級不能保證吸光度,有可能產(chǎn)生偏差,價格也相差不大,所以盡量使用HPLC級。
3、壓力
乙腈低,柱內(nèi)承受的壓力,根據(jù)有機溶劑的種類或混合比率的不同而異,水/乙腈,水/甲醇混合液的比率與輸液壓力的關(guān)系中,甲醇與水混合,壓力增高,而乙腈同樣與水混合且并不如此。所以,乙腈一方,在同樣的流速下不在柱內(nèi)加上多余的壓力。從上述兩項,可以確認(rèn)使用乙腈的意義,那么,甲醇除了價格以外,還有沒有其化優(yōu)點呢?
4、洗脫能力
一般而言,乙腈較強。乙腈和甲醇分別用同樣的比率與水混合時,一般情況下,乙腈的洗脫能力強。特別是混合比率低時,從咖啡因和苯酚的洗脫來看,獲得同樣的保留時間,乙腈的比率,只需甲醇的比率的一半以下即可。另一方面,有機溶劑100%或與此極接近時,從胡蘿卜素和膽甾醇來看,常常都是甲醇的洗脫能力強。混合比在50比1等較為特殊時,調(diào)制的誤差大,影響保留時間,或平衡化的時間長,乙腈遇到這種情況時,用甲醇的10比1混合代替乙腈,這樣操作方便些。溶劑受溫度影響時,不采用容器定量,而采用重量的方法(考慮比重),可使混合比的誤差減小。
5、分離(洗脫)的選擇性
兩者的差異,乙腈和甲醇在分離的選擇性上不同。由于有機溶劑分子的化學(xué)性質(zhì)(甲醇和乙醇是質(zhì)子性,乙腈和四氫呋喃是非質(zhì)子性)不同所致。因此,在用乙腈類不能獲得分離的選擇性,就試用甲醇類看看。
6、峰形
用時出現(xiàn)差異。像水楊酸化合物(在鄰位上具有羧基或甲氧基的苯酚化合物)等,用乙腈類時拖尾大,用甲醇類可抑制??墒?,一般情況下,聚合物類反相柱,與硅膠柱相比,更具有峰形寬的傾向,特別是用聚苯乙烯分析柱芳香族化合物等時常見。這在流動相是甲醇時非常顯著,而用乙腈時不明顯。為此,用聚合物類反相用柱時建議采用后者(乙腈類),這是因為乙腈使凝膠膨潤。
7、流動相的脫氣,乙腈類要注意
混合溶劑的置制,不說在LC裝置內(nèi),只談預(yù)先在流動相瓶內(nèi)進行時,(等濃度系統(tǒng))。甲醇與水混合時發(fā)熱,多余的溶解空氣較易變?yōu)槊摮鰵馀荩摎馊菀祝?。而乙腈由于吸熱冷卻,隨著慢慢回到室溫,產(chǎn)生氣泡,所以要考慮脫氣(加溫攪拌,過濾膜,He脫氣等)。
8、結(jié)論
以上反相色譜法流動相常用的乙腈和甲醇進行了比較。粗略地講是,使用乙腈HPLC級,在選擇性,峰形差時試用甲醇HPLC,但根據(jù)各種不用性質(zhì)設(shè)計分析條件也是必要的。